直接稀释

将不同体积的同一原液直接转移到测定板上

IC的产生50或电子商务50数据是药物发现过程的关键组成部分。IC的设置50曲线一直是液体处理的难题,很容易出错。使用回声液体处理程序消除这些错误,使发现可能会被其他方法错过。通过将Echo Liquid Handler与Labcyte自动化回声软件应用程序,集成电路50数据生成比传统方法更准确、更有效。

传统系列稀释工作流程

  • 针尖上可能会发生样品丢失
  • 有可能产生渗滤液和顶部的交叉污染
  • 复合错误可能会因传输的串行性质而发生
传统系列稀释工作流程

Echo直接稀释工作流程

  • 溶液永远不要与移液管尖端接触
  • 消除渗滤液和交叉污染的可能性
  • 样品直接转移到分析孔中
Echo直接稀释工作流程

传统的方法:连续稀释法

传统上,科学家们已经着手研究集成电路的产生50类似的数据。首先在DMSO或缓冲液中加入高浓度的药物,然后在一系列井中进行稀释。少量高浓度的井被转移到下一个井,其中含有缓冲液或溶剂。重复这一过程,最终每一口井的浓度增量都低于前一口井。由于该技术一直是集成电路的唯一可行方法50曲线的生成,这种方法固有的缺点往往没有被考虑。这种技术的风险包括:

误差传播

移液过程中的小错误会因连续稀释过程而加剧。移液精度或精度10%的误差可能导致12点集成电路的另一端出现40倍的浓度误差50曲线。

提示联系

塑料一次性与样品接触的提示已经显示出来干扰使干扰试验

化合物沉淀

许多连续稀释技术都是从DMSO中的化合物稀释到缓冲液中开始的。由于第一步是化合物的最高浓度,缓冲溶液的变化会导致物质析出。在连续稀释法中对第一个样品的后续稀释可能以远低于预期的浓度转移化合物。

复合浪费

为了避免上述情况,一些公司将化合物连续稀释到相同的存储溶液(通常是DMSO)。生成的集成电路50然后将DMSO以较小的体积添加到测定中。虽然这种方法降低了复合沉淀的风险,但它通常需要使用更多的复合,以产生完整的曲线。这导致了可能是独特的或不容易得到的化合物的浪费,并增加了二甲基二磺酸的浪费和处理成本。

在连续稀释过程中,误差的主要缺点是显而易见的。每一种风险都可能导致化合物在筛选方法中显得不那么有效。例如,在抑制研究中,连续稀释过程中的错误可能会导致研究人员错误地对导致药效的因素进行排序,排除潜在候选药物,或排除可能成为潜在候选药物的整个类别的化合物。在ADME Tox研究中,连续稀释过程的错误可能会导致化合物看起来毒性较低,从而导致注定要失败的试验的候选药物得以继续进行。因为集成电路有太多的风险50曲线的生成过程,是实验设置正确的关键。

直接用Echo液体处理器稀释

直接稀释是一个过程回声液体处理程序生成集成电路50曲线,转移精确的液滴溶液直接到单独的分析井,没有尖端。这个简单的过程可以产生12点集成电路50曲线从一个库存解决方案和两个中间稀释,提高可靠性和数据质量。

直接稀释 r e c t稀释 r e c t稀释 25问 7.5问 250问 2.5问 10毫米 年代 t 内涵 2.5问 30问 92.5问 100µM n t e r 读出 一个 t e 10问 2.5问 37.5问 115问 1µM n t e r 读出 一个 t e 12.5问 5问

例如:12点稀释系列,起始浓度为10毫米

图:使用直接稀释创建的11点曲线的例子。上面的图像显示了期望的浓度是如何通过直接从库存样品和两个中间稀释的库存样品转移来创建的。由此产生的集成电路50显示在底部。

直接稀释法测定效力 效能分析 直接稀释 nhibition 抑制剂浓度(M) One hundred. 80 60 40 20. 0 1平台以及 1 e-09 1 e-08 1 e-07 1 e-06 1 e-05
所需的浓度 中间板卷 目标板卷 DMSO回填 最后一卷
10µM 0问 75问 0问 75问
3.3µM 0问 25问 50问 75问
1µM 0问 7.5问 67.5问 75问
0.33µM 0问 2.5问 72.5问 75问
100海里 250 nL stock + 24.75µL DMSO 75问 0问 75问
33.3纳米 250 nL stock + 24.75µL DMSO 25问 50问 75问
10纳米 250 nL stock + 24.75µL DMSO 7.5问 67.5问 75问
3.3纳米 250 nL stock + 24.75µL DMSO 2.5问 72.5问 75问
1海里 2.5 nL stock + 25µL DMSO 75问 0问 75问
0.33纳米 2.5 nL stock + 25µL DMSO 25问 50问 75问
0.1纳米 2.5 nL stock + 25µL DMSO 7.5问 67.5问 75问
0.033纳米 2.5 nL stock + 25µL DMSO 2.5问 72.5问 75问

在上面的例子中,前四种浓度是直接从原料板中提取的。接下来的四种浓度是将原料药以1:100的比例稀释到中间板,然后从中间板转移到目标板。最后三种浓度是通过将原料药以1:10 000稀释到中间板并转移到目标板。由于所有转移都是在不同数量的2.5 nL增量液滴中进行的,浓度的精度不容易出现传统连续稀释所固有的传播误差。

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直接稀释Echo软件

回声剂量反应应用简化了直接稀释的协议创建。一个向导指导研究人员通过映射从库存和中间浓度的转移,以创建不同浓度范围的曲线。整个工作流可以在一个协议中进行管理,样本可以来自一个源板,也可以根据一个文件进行挑选。内置的模拟器显示了每条曲线的创建,用于快速验证传输协议。

Labcyte自动化系统是高效、高通量集成电路的成熟解决方案50分析生产。的访问实验室工作站利用节奏自动化软件直接从任何Echo剂量响应协议构建自动化程序。所有的板材移动和回填步骤都是由软件自动优先排序和安排的,而不是由操作员。